E.coli具有遺傳背景清晰、細胞增殖快、成本低、表達量高、穩定性好和抗污染能力強等特點,適用于多種蛋白的表達。大腸桿菌蛋白表達系統是目前應用較為廣泛,也是比較經濟實惠的蛋白表達系統。缺點是該表達系統易形成包涵體,含有內毒素,沒有翻譯后修飾的加工功能。該系統適用于表達原核來源的蛋白或不需要翻譯后修飾的真核來源蛋白,特別是小分子蛋白。
藍景科信擁有豐富的E.coli蛋白表達純化經驗,熟練運用多種表達宿主菌,提供多種表達載體和標簽的選擇,為您提供優質的原核蛋白表達服務。
原核蛋白表達是指在原核細胞中表達蛋白質,通常使用大腸桿菌或酵母細胞作為宿主細胞。原核蛋白表達具有快速、簡便、大規模產生目的蛋白質的優點,廣泛應用于生物技術研究、藥物開發、工業生產等領域。
原理:
原核蛋白表達的基本原理是將外源基因克隆到表達載體中,通過將重組載體導入宿主細胞中使之表達目的蛋白。基于表達載體的選擇不同,有多種表達策略可供選擇,例如強化啟動子、可誘導的表達系統、標簽蛋白標記等。此外,可以通過優化培養條件、細胞密度及時間等方法來提高蛋白產量。
原核蛋白表達的操作方法:
1.選擇適合的表達載體:合適的表達載體包括表達啟動子、編碼區、終止信號和選擇標記等。常用的載體有pET、pGEX、pMAL、pETDuet等。選擇適合的載體要考慮到表達效率、純度和易于操作等因素。
2.將目的基因克隆到載體中:將目的基因與載體酶切、連接,形成重組載體。連接需要注意將基因位于正確位置,使用合適的連接方式。
3.轉化宿主細胞:將重組載體導入宿主菌株E.coli中,可采用熱激法、化學法、電滲法等方式。需要注意重組過程的無菌操作和選擇正確的培養條件。
4.優化培養條件:通過調整適宜的溫度、菌種、基本培養液的選擇等因素,提高目的蛋白的表達率。
5.蛋白質提取:通過離心、超聲波裂解、化學方法等方式用不同的載體將表達蛋白提取出來。
6.純化:對提取出來的蛋白質進行純化,常用的有離子交換、凝膠過濾、親和層析、逆流層析等方法。選擇純化方式需要考慮成本、產量和純度等因素。
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