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大鼠心肌細(xì)胞H9C2
l細(xì)胞背景
B.Kimes and B.Brandt從源于BD1X大鼠胚胎心臟組織的克隆細(xì)胞株亞克隆了H9c2(2-1)細(xì)胞株，它表現(xiàn)許多骨骼肌的特性。這個(gè)細(xì)胞株中的成肌細(xì)胞能融合形成多核的肌管。如果培養(yǎng)基中的血清濃度下降到1%，融合發(fā)生得很快。
l細(xì)胞特性
1）來源：心臟
2）形態(tài)：成肌細(xì)胞，貼壁生長(zhǎng)
3）含量：>1x106細(xì)胞數(shù)
4）規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝
5)用途：僅供科研使用。
l培養(yǎng)條件：
1）準(zhǔn)備DMEM（含1.5g/L NaHCO3推薦：awcell-128-0001）或(GIBCO,貨號(hào)12800017，添加NaHCO3 1.5g/L)培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗1%。
2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
l注意事項(xiàng)：
注意:大鼠心肌細(xì)胞H9C2該細(xì)胞在DMEM(含1.5g/LNaHCO3)培養(yǎng)基中生長(zhǎng)良好，大部分品牌的DMEM含有較高濃度的NaHCO3（3.7g/L），若使用DMEM（3.7g/L NaHCO3）培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)需要提高CO2濃度（7%-10%）。
對(duì)于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2.加入0.25％（w/v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長(zhǎng)消化時(shí)間），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10?S的培養(yǎng)基來終止消化。
3.輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的*培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長(zhǎng)活力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。
3）細(xì)胞凍存:收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。
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